cap. 1 conceptos de bioquimica
BIBLIOTECAS DE
FRAGMENTOS
BIBLIOTECA DE CLONOS.
Una biblioteca de clonos es una colección de clonos, es decir
una colección de colonias de bacterias (sí la biblioteca
se ha construído en un plásmido o en un cósmido)
o de placas de fagos (sí el vector usado ha sido un fago)
con DNA recombinante que incluye muchas de las secuencias de un
conjunto muy grande, tal como el genoma entero de un organismo,
la población de secuencias expresadas en un tipo celular
particular o las secuencias presentes en un fragmento grande de
DNA.
La estrategia general para la construcción
de una biblioteca de clonos es:
- El aislamiento y preparación de fragmentos de DNA (DNA
celular, DNA complementario o DNA derivado de un clono más
grande).
- La unión a un vector apropiado.
- La introducción a un célula anfitriona apropiada.
Las bibliotecas se dividen, desde el punto de vista
del contenido genómicas, de DNA complementario y restringidas
(que solo contienen partes especificadas del genoma).
- BIBLOTECA GENÓMICA: Una biblioteca genómica
se construye empezando con el DNA del genoma total de un organismo,
este genoma se corta por rompimiento mecánico o por digestión
de una endonucleasa de restricción para general una población
se secuencias que se superponen. Estas secuencias se separan
por tamaño y se escoje la clase apropiada al vector que
se va a usar. Los fragmentos producidos se ligan al vector escogido
adecuadamente, se transfieren a una célula viva y se
clonan.
-
BIBLIOTECA DE DNA COMPLEMENTARIO:
Una biblioteca genómica contiene secuencias que se transcriben
y secuencias que no se transcriben, mientras que un biblioteca
de cDNA (DNA complementario) contiene solo secuencias que se
transcriben y que no son eliminadas durante el procesamiento
del RNA. Esta se construye a partir dle mRNA de un tipo particular
de célula; con base en este mRNA, se produce cDNA utilizando
transcriptasa inversa la cual produce DNA de una banda que va
a convertirse en DNA de dos bandas con la enzima DNA polimerasa
I de E. coli y este DNA se somete en forma adecuada a la reacción
de transferencia terminal y luego, el DNA resultante se clona.
- BIBLIOTECA RESTRINGIDA: Se construye de la misma manera
que las anteriores y contiene una muestra al azar que puede fácilmente,
representar todas las secuencias presentes en un fragmento muy
grande de DNA. Este tipo de biblioteca es muy importante en el
análisis de la estructura y función de los genes
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