Vicerrectoría General
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SECUENCIAMIENTO
MÉTODO DIDESOXI
El secuenciamiento de DNA es el proceso por medio del cual se determina el orden exacto de las cuatro bases bases A, T, C y G del genoma de un organismo o de cualquier fragmento de DNA.
Fred Sanger, investigador de la universidad de Cambridge (Inglaterra) es uno de los pioneros en la secuenciación de proteínas, él invento en el año de 1977 el método de secuenciación de ADN llamado "interrupción de la cadena" o método didesoxi, (pro el cual gano el premio Nobel), el cual sigue siendo la base para la moderna tecnología de secuenciación automática.
El método de Sanger trataba de sintetizar una nueva cadena de DNA que fuera el complemento de una plantilla de una sola cadena, de manera que la identidad de la última letra estuviera determinada, es decir, el DNA es usado como una plantilla para generar un conjunto de fragmentos que difieren en longitud por una sola base, los fragmentos son separados en un gel por tamaño y la secuencia se lee en una escala de bandas reactivas.
Además Sanger incluyo un nucleótido didesoxi modificado, está base modificada se incorpora a la cadena de DNA sin ningún problema, pero no puede establecer un enlace con la siguiente base de la cadena, con lo que la cadena de DNA se ve interrumpida, este procedimiento se repite para los cuatro nucleótidos, con lo que se obtiene el conjunto de fragmentos de DNA
MÉTODO DEL ESCOPETAZO
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James Weber, director de la Marshfield Research Foundation de Winsconsin, alrededor del año de 1993 empezó a trabajar en un método de secuenciamiento que no necesitara del tedioso proceso de localizar y secuenciar fragmentos previamente ordenados de cada cromosoma, es decir que se pudiera secuenciar cualquier genoma sin la necesidad de realizar mapas cromosómicos previos. El método de Weber llamado "El método del escopetazo" rompe todo el DNA de un genoma, luego secuencia estos fragmentos y por último con poderoso medios informaticos se ensambla la secuencia, los algoritmos para emsamblar la secuencia fuerón diseñador por Gen Myers investigador de la universidad de Arizona en Tucson.
Este método ha sido utilizado con mucho éxito por la empresa privada Celera Genomics, fundada por Craig Venter, para secuenciar el genoma humano, está empresa además ha secuenciado completamente el genoma de la mosca de la fruta y ha manisfestado tener el 90% de la secuencia del genoma humano.
