Fijación.

La finalidad de fijar los tejidos es conservarlos con el menor grado de alteración , inhibiendo los cambios autolíticos y el crecimiento bacteriano. También producen la coagulación del citoplasma el cual se torna insoluble y endurecen el tejido para facilitar el corte durante la preparación. Se obtiene por medios físicos o químicos.

Medios físicos

El calor de la llama o la congelación de la muestra.

Medios químicos

Como líquidos fijadores son utilizados, el Formol al 4%, 5% y 10%, el Alcohol, el Acido Acético, el Acido Pícrico, el Bicloruro de Mercurio y el Bicromato de Potasio. La elección del fijador depende del tejido y coloración que se va a emplear. El tiempo de fijación varía de pocos minutos a varias horas. En nuestro medio es usual utilizar Formol al 10%. El volumen del fijador debe ser veinte veces el volumen de la muestra.

Deshidratación

El procedimiento consiste en extraer el agua contenida en el tejido y reemplazarla por un líquido deshidratante como el alcohol, la acetona o el propanolol. Lo más utilizado es el alcohol en concentraciones crecientes, 70, 80, 90 y 96 grados. La deshidratación es realizada en una a dos horas.

Aclaración

Es la extracción y substitución del agente deshidratante por Xilol, Benzol, Toluol, Cloroformo o Xileno, durante treinta a sesenta minutos.

Inclusión

Una vez aclarado el tejido, debe ser infiltrado con un agente de inclusión, que por lo general es Parafina o Celodina. El proceso es realizado tres veces con parafina líquida a una temperatura promedio de 56 grados centígrados. Posterior a la inclusión se hace solidificar la parafina y se forman bloques de 3x2x1.5 centímetros que contienen el tejido a estudiar.

Para estudios especiales, pueden incluirse los tejidos sin someterlos a fijación, deshidratación y aclaración. Este proceso se realiza por el método de congelación y desecación, en el que se congela rápidamente el tejido fresco, se deshidrata y a continuación se hace la inclusión (biopsias por congelación).

Corte

El tejido incluido en parafina, es cortado en fragmentos de cinco a diez micras con un Micrótomo. Los cortes contienen entonces tejido y parafina y son denominados, membranas de corte. Las membranas son colocadas en agua tibia para que queden extendidas y se evite el recogimiento del tejido.

Montaje de Corte

El corte es sacado del agua y colocado en una laminilla portatobjetos. Esta debe colocarse sobre una platina caliente para evaporar el agua y lograr mejor fijación del tejido a la lámina antes de su coloración.

Coloración

Antes de iniciar las fases de coloración, el tejido montado en la lámina debe ser aclarado con dos baños Xilol o Toluol, para eliminar la parafina de la fase de inclusión.

La finalidad de la coloración es destacar el contraste natural y hacer más evidentes ciertas células, componentes tisulares y material extrínseco. Los colorantes más utilizados son la Hematoxilina (Básica) y la Eosina (Acida). De acuerdo con su naturaleza, el colorante tendrá afinidad por uno u otro elemento celular. Así los elementos celulares o tisulares basófilos, se tiñen de azul o violeta y los acidófilos de rosado.